طراحی وساخت سازه ژنی حاوی توالی هایkdel، signal sequence ، 3arc , 5utr جهت افزایش بیان گزارشگر gus بذری

تولید پروتئینهای نوترکیب در بذر گیاهان به دلایل متعددی از جمله هزینه پائین تولید، پایداری بیشتر پروتئین، تخلیص راحت تر، ایمنی بیشتر به عنوان یک جایگزین مناسب مورد توجه قرار گرفته است. یکی از مهمترین فاکتورها جهت مقرون به صرفه شدن این تکنولوژی، بالا بردن بیان پروتئین نوترکیب است. ازراهکارهای افزایش تظاهر و تجمع پروتئین نوترکیب ، طراحی و تهیه سازه مناسب است به نحوی که همزمان با بیان پروتئین در بافت مناسب گیاه با استفاده از توالی های تعبیه شده در سازه افزایش بیان را نیز به همراه داشته باشد. در این تحقیق جهت تهیه سازه اختصاصی بذر از وکتور بیانی pbi121 که در آن پروموتر اختصاصی بذر napin جایگزین پروموتر عمومی camv35s شده بود، استفاده گردید. توالی های signal sequence (ss) و kdel جهت هدایت و نگهداری پروتئین به شبکه آندوپلاسمی، توالی mar به عنوان توالی که از خاموشی ژن منتقل شده ممانعت می کند،در سازه فوق تعبیه شد. برای این منظور ابتدا با طراحی آغازگرهای اختصاصی و واکنش pcr توالی ss در بالادست ژن gus و توالیهای mar و kdel در پائین دست آن قرار گرفتند. قطعه حاصله در وکتور کلونینگ ta همسانه سازی و سپس با روش pcr colony، هضم آنزیمی و توالی یابی تائید شد. در مرحله بعد با ساب کلونینگ این قطعه در وکتور گیاهی pbi121 سازه نهایی تهیه شد.